Einführung
Die Gelelektrophorese ist eine grundlegende Technik der Molekularbiologie und wird häufig zur Trennung von Proteinen, Nukleinsäuren und anderen Makromolekülen eingesetzt. Die richtige Kontrolle des Probenvolumens, der Spannung und der Elektrophoresezeit ist entscheidend für die Erzielung genauer und reproduzierbarer Ergebnisse.Unser Laborkollege bietet anBest Practices für die Verwaltung dieser Parameter während der SDS-PAGE-Gelelektrophorese.
Beijing Liuyi Biotechnology Gelelektrophorese-Produkte
Probenvolumen: Konsistenz sicherstellen
Bei der Durchführung der SDS-PAGE-Elektrophorese ist das Probenvolumen ein Schlüsselfaktor, der die Auflösung Ihrer Ergebnisse erheblich beeinflussen kann. Im Allgemeinen wird empfohlen, 10 µL Gesamtprotein pro Vertiefung zu laden. Um die Konsistenz zu gewährleisten und eine Probendiffusion zwischen benachbarten Wells zu verhindern, ist es wichtig, in alle leeren Wells ein gleiches Volumen 1x Ladepuffer zu laden. Diese Vorsichtsmaßnahme trägt dazu bei, die Ausbreitung von Proben auf benachbarte Spuren zu verhindern, was passieren kann, wenn der Schacht leer bleibt.
Bevor Sie Ihre Proben laden, beginnen Sie immer mit der Zugabe eines Molekulargewichtsmarkers in eine Vertiefung. Dies ermöglicht eine einfache Identifizierung der Proteingrößen nach der Elektrophorese.
Spannungsregelung: Geschwindigkeit und Auflösung ausgleichen
Die während der Elektrophorese angelegte Spannung beeinflusst direkt sowohl die Geschwindigkeit, mit der Proben durch das Gel wandern, als auch die Auflösung der Trennung. Für SDS-PAGE empfiehlt es sich, mit einer niedrigen Spannung von etwa 80 V zu beginnen. Diese anfängliche niedrige Spannung ermöglicht eine langsame und gleichmäßige Wanderung der Proben und konzentriert sie beim Eintritt in das Trenngel in einem scharfen Band.
Sobald die Proben vollständig in das Trenngel gelangt sind, kann die Spannung auf 120 V erhöht werden. Diese höhere Spannung beschleunigt die Migration und stellt sicher, dass die Proteine effizient nach ihrem Molekulargewicht getrennt werden. Es ist wichtig, den Fortschritt der Bromphenolblau-Farbstofffront zu überwachen, der den Abschluss der Elektrophorese anzeigt. Für Gele mit einer Konzentration von 10–12 % sind normalerweise 80–90 Minuten ausreichend; Bei 15 %-Gelen müssen Sie die Laufzeit jedoch möglicherweise etwas verlängern.
Zeitmanagement: Wissen, wann man aufhören muss
Der Zeitpunkt ist ein weiterer entscheidender Faktor bei der Gelelektrophorese. Eine zu lange oder zu kurze Anwendung des Gels kann zu einer suboptimalen Trennung führen. Die Wanderung des Bromphenolblau-Farbstoffs ist ein nützlicher Indikator: Wenn er den Boden des Gels erreicht, ist es normalerweise an der Zeit, den Lauf zu stoppen. Für Standardgele wie 10–12 % ist eine Elektrophoresedauer von etwa 80–90 Minuten typischerweise ausreichend. Bei Gelen mit einem höheren Prozentsatz, z. B. 15 %, sollte die Laufzeit verlängert werden, um eine vollständige Trennung der Proteine sicherzustellen.
Pufferverwaltung: Puffer wiederverwenden und vorbereiten
Der Elektrophoresepuffer kann je nach den spezifischen Bedingungen Ihres Labors ein bis zwei Mal wiederverwendet werden. Für optimale Ergebnisse wird jedoch empfohlen, frischen 10-fachen Puffer vorzubereiten und ihn unmittelbar vor der Verwendung zu verdünnen. Dadurch wird sichergestellt, dass der Puffer seine Wirksamkeit behält, was zu zuverlässigeren Elektrophoreseergebnissen führt.
Beijing Liuyi Biotechnology Gelelektrophorese-Produkte
Durch sorgfältige Steuerung des Probenvolumens, der Spannung und der Elektrophoresezeit können Sie die Genauigkeit und Reproduzierbarkeit Ihrer Gelelektrophoreseergebnisse erheblich verbessern. Durch die Implementierung dieser Best Practices in Ihre Laborarbeit können Sie klarere und deutlichere Bänder erzielen, was zu besseren Daten für die nachgelagerte Analyse führt.
Wenn Sie weitere gute Methoden zur Optimierung von Gelelektrophorese-Experimenten haben, können Sie diese gerne mit uns besprechen!
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) ist seit mehr als 50 Jahren auf die Herstellung von Elektrophoresegeräten spezialisiert und verfügt über ein eigenes professionelles technisches Team und ein Forschungs- und Entwicklungszentrum. Wir verfügen über eine zuverlässige und vollständige Produktionslinie vom Entwurf bis zur Inspektion, über ein Lager und Marketingunterstützung. Unsere Hauptprodukte sind Elektrophoresezelle (Tank/Kammer), Elektrophorese-Netzteil, blauer LED-Transilluminator, UV-Transilluminator, Gelbild- und Analysesystem usw. Wir liefern auch Laborinstrumente wie PCR-Instrumente, Vortex-Mischer und Zentrifugen für das Labor.
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Zeitpunkt der Veröffentlichung: 20. August 2024