Die Gelelektrophorese ist eine der wichtigsten Methoden der Molekularbiologie zur Analyse von DNA.Bei dieser Methode wandern DNA-Fragmente durch ein Gel, wo sie nach Größe oder Form getrennt werden.Sind Ihnen bei Ihren Elektrophorese-Experimenten jedoch schon einmal Fehler aufgefallen, wie zum Beispiel verschmierte Banden auf dem Agarosegel oder keine Banden auf dem Gel?Was könnte die Ursache für diese Fehler sein?
Unsere Techniker haben hier einige Fehlerbehebungsschritte zu Ihrer Information zusammengefasst.
1. Verschmierte Banden auf Agarosegel
●Die DNA wurde abgebaut.Vermeiden Sie eine Kontamination mit Nukleasen.
● Der Elektrophoresepuffer ist nicht frisch.Nach wiederholter Verwendung von Elektrophoresepuffer nimmt die Ionenstärke ab und sein pH-Wert steigt, sodass die Pufferkapazität schwächer wird, was sich auf den Elektrophoreseeffekt auswirkt.Es wird empfohlen, den Elektrophoresepuffer regelmäßig zu ersetzen.
● Es wurden falsche Elektrophoresebedingungen verwendet.Lassen Sie die Spannung nicht über 20 V/cm ansteigen und halten Sie während der Elektrophorese eine Temperatur von <30 °C ein.Für die Riesen-DNA-Strangelektrophorese sollte die Temperatur <15 °C betragen. Überprüfen Sie, ob der Elektrophoresepuffer über genügend Pufferkapazität verfügt.
● Es wurde zu viel DNA auf das Gel geladen.Verringern Sie die DNA-Menge.
● Zu viel Salz in der DNA.Verwenden Sie eine Ethanolfällung, um überschüssige Salze im Voraus zu entfernen.
● Die DNA war mit Protein verunreinigt.Verwenden Sie Phenolextraktionen, um Proteine im Voraus zu entfernen.
● Die DNA wurde denaturiert.Vor der Elektrophorese nicht erhitzen.DNA im Puffer mit 20 mM NaCl verdünnen.
2. Anomalien der DNA-Bandenmigration
● Renaturierung der COS-Stelle des λHind III-Fragments.Erhitzen Sie die DNA vor der Elektrophorese 5 Minuten lang auf 65 °C und kühlen Sie sie dann 5 Minuten lang auf einem Eisgerät ab.
● Es wurden falsche Elektrophoresebedingungen verwendet.Lassen Sie die Spannung nicht über 20 V/cm ansteigen und halten Sie während der Elektrophorese eine Temperatur von <30 °C ein.Überprüfen Sie, ob der Elektrophoresepuffer über genügend Pufferkapazität verfügt.
● Die DNA wurde denaturiert.Vor der Elektrophorese nicht erhitzen.DNA im Puffer mit 20 mM NaCl verdünnen.
3. Schwache oder keine DNA-Banden auf dem Agarosegel
● Es war eine unzureichende Menge oder Konzentration an DNA auf dem Gel geladen.Erhöhen Sie die DNA-Menge.Die Polyacrylamid-Gelelektrophorese ist etwas empfindlicher als die Agarose-Elektrophorese und die Probenbeladung kann entsprechend reduziert werden.
● Die DNA wurde abgebaut.Vermeiden Sie eine Kontamination mit Nukleasen.
● Die DNA wurde vom Gel elektrophoretisch aufgetrennt.Führen Sie eine kürzere Elektrophorese des Gels durch, verwenden Sie eine niedrigere Spannung oder verwenden Sie einen höheren Gelanteil.
● Für die Visualisierung der mit Ethidiumbromid gefärbten DNA wurde eine falsche W-Lichtquelle verwendet.Für eine höhere Empfindlichkeit verwenden Sie W-Licht mit kurzer Wellenlänge (254 nm).
4. DNA-Banden fehlen
●Die kleine DNA wurde vom Gel elektrophoretisch aufgetrennt.Führen Sie eine kürzere Elektrophorese des Gels durch, verwenden Sie eine niedrigere Spannung oder verwenden Sie einen höheren Gelanteil.
● Schwierig, die DNA-Banden ähnlicher Moleküle zu unterscheiden.Erhöhen Sie die Elektrophoresezeit und überprüfen Sie die Konzentrationdes Gels, um sicherzustellen, dass der richtige Gelanteil verwendet wird.
● Die DNA wurde denaturiert.Vor der Elektrophorese nicht erhitzen.DNA im Puffer mit 20 mM NaCl verdünnen.
● Die DNA-Stränge sind riesig und die herkömmliche Gelelektrophorese ist nicht geeignet.Analysieren Sie mittels Puls-Gelelektrophorese.Welche anderen Probleme hatten Sie mit der Agarosegelelektrophorese?Wir werden in Zukunft noch mehr nach Reiseführern recherchieren.
Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd (Liuyi Biotech) ist ein spezialisiertes Unternehmen, das sich auf Elektrophorese-bezogene Produkte in China konzentriert.Seine Geschichte beginnt im Jahr 1970, als China noch nicht in die Reform- und Öffnungszeit eingetreten war.Im Laufe der jahrelangen Entwicklung verfügt Liuyi Bitotech über eine eigene Marke, die auf dem heimischen Markt für Elektrophoreseprodukte als Liuyi-Marke bekannt ist.
Die Marke Liuyi hat in China eine mehr als 50-jährige Geschichte und das Unternehmen kann weltweit stabile und qualitativ hochwertige Produkte anbieten.Durch die jahrelange Entwicklung ist es Ihrer Wahl würdig!
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Zeitpunkt der Veröffentlichung: 09.05.2022