Elektrophoresevorbereitung und Probenanwendung auf Acetat-Cellulose-Membran

Vorverarbeitung der Acetat-Cellulose-Membran

Schneidmembran:

Schneiden Sie die Acetatzellulosemembran je nach Menge der getrennten Proben in bestimmte Größen, typischerweise 2,5 cm x 11 cm oder 7,8 cm x 15 cm.

Beispielanwendungszeile markieren:

• Markieren Sie auf der nicht glänzenden Seite der Membran leicht die Probenauftragslinie mit einem Bleistift.
• Die Position der Auftragungslinie kann 2-3 cm von einem Ende der Membran oder manchmal in der Nähe der Mittellinie gewählt werden.
• Die Position der Auftragslinie wird üblicherweise anhand vorläufiger Elektrophoreseversuche bestimmt.

Eintauchen in Elektrodenpufferlösung:

• In eine flache Schale oder Kulturschale die Elektrodenpufferlösung einfüllen.
• Lassen Sie die Membran vorsichtig auf der Oberfläche der Elektrodenpufferlösung schweben und achten Sie darauf, dass die nicht glänzende Seite nach unten zeigt.
• Während der Boden der Membran die Elektrodenpufferlösung aufnimmt, sinkt sie allmählich ab, bis sie vollständig eingetaucht ist.

Überschüssige Flüssigkeit entfernen und aufsaugen:

• Nachdem die Membran die Elektrodenpufferlösung durchdrungen hat, entfernen Sie sie vorsichtig mit einer stumpfen Pinzette.
• Legen Sie die Membran zwischen zwei Lagen Filterpapier, um überschüssige Elektrodenpufferlösung aufzusaugen und übermäßige Trockenheit zu vermeiden.
• Wenn auf der Membran ein weißer, undurchsichtiger Bereich erscheint, der auf eine übermäßige Trocknung hinweist, tauchen Sie die Membran erneut in die Elektrodenpufferlösung und absorbieren Sie sie bis zur entsprechenden Menge mit Filterpapier.

Beispiel-Bewerbungsprozess

Auswahl und Betrieb einer Beispielanwendungslinie:

Tragen Sie die Probe entlang der Probenauftragslinie auf die nicht glänzende Seite der Membran auf, normalerweise in einem linearen Muster und nicht punktförmig.

Beispielanwendung für qualitative Analyse:

• Verwenden Sie Kapillarröhrchen (mit einem Durchmesser von 0,5–1,0 mm) oder Formen für die qualitative Probenaufbringung.
• Tauchen Sie die Probe während der qualitativen Analyse ein und „stempeln“ Sie sie entlang der Probenauftragslinie.

Beispielanwendung für quantitative Analyse:

• Verwenden Sie eine Mikroliterspritze für die Probenaufbringung zur quantitativen Analyse.
• Wenn Sie ein Kapillarröhrchen oder eine Mikroliterspritze verwenden, bewegen Sie diese sanft auf und ab oder nach links und rechts entlang der Probenauftragslinie, bis das vorgegebene Probenvolumen aufgetragen ist.

Steuern der Abmessungen der Probenleitung:

• Nach dem Auftragen jeder Probe auf die Membran beträgt die Länge der Probenleitung im Allgemeinen 1,5 cm, wobei die Breite im Allgemeinen 4 mm nicht überschreitet.
• Der Abstand zwischen den Probenleitungen und zwischen der Probenleitung und der langen Kante der Membran beträgt im Allgemeinen 3 bis 5 mm.

Anpassen der Sample-Lautstärke:

Die Menge bzw. das Volumen der aufgetragenen Probe schwankt je nach Faktoren wie Probenkonzentration, Färbung und Analysemethoden erheblich.

Probenvolumen während der quantitativen Analyse:

Für die quantitative Analyse beträgt das aufgetragene Probenvolumen pro Zentimeter der Probenauftragslinie im Allgemeinen 0,1–0,5 μl, was der Menge einer 5–1000 μg großen Proteinprobe entspricht.

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Experiment zur Trennung von Serumprotein durch Zelluloseacetat-Membranelektrophorese

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