Prinzip
Die Celluloseacetat-Filmelektrophorese ist eine Elektrophoresemethode, bei der ein Celluloseacetatfilm als Träger verwendet wird.Das Phänomen, bei dem sich geladene Teilchen unter Einwirkung eines elektrischen Feldes zur gegenüberliegenden Elektrode bewegen, wird Elektrophorese genannt.Da jedes Protein einen spezifischen isoelektrischen Punkt hat, wird das Protein positiv geladen und bewegt sich in Richtung der negativen Elektrode, wenn es in eine Lösung gegeben wird, deren pH-Wert unter seinem isoelektrischen Punkt liegt.Im Gegenteil, es bewegt sich zum Pluspol.Da die Geschwindigkeit der Bewegung von Proteinmolekülen in einem elektrischen Feld von ihrer Ladung, Form und Größe der Moleküle abhängt, können verschiedene Proteine durch Elektrophorese getrennt werden.Serum enthält eine Vielzahl von Proteinen, die alle isoelektrische Punkte bei pH 7,5 oder weniger haben.Wenn das Serum zur Durchführung der Elektrophorese in einen Puffer mit pH-Wert 8,6 gegeben wird, sind alle Serumproteine negativ geladen und bewegen sich im elektrischen Feld zur positiven Seite.Da verschiedene Serumproteine bei gleichem pH-Wert unterschiedliche Ladungen aufweisen, sind die Molekülpartikel unterschiedlich groß und damit unterschiedlich schnell wandernd, und sie werden durch Elektrophorese getrennt.Die isoelektrischen Punkte und Molekulargewichte der Serumproteine sind in der folgenden Tabelle aufgeführt:
| Eiweiß | Isoelektrische Punkte (PI) | Molekulargewicht |
| Albumin | 4,88 | 69 000 |
| α1-Globulin | 5.00 | 200 000 |
| α2-Globulin | 5.06 | 300 000 |
| β-Globulin | 5.12 | 9.000 bis 150.000 |
| γ-Globulin | 6,85~7,50 | 156 000~ 300 000 |
Das Experiment besteht darin, verschiedene Proteine im Blutserum mit einer Celluloseacetatmembran (Abk. CAM) als Trägermedium zu trennen.CAM ist eine Art SchaumgummieFilm mit guter Gleichmäßigkeit und einer Dicke von 0,1 mm bis 1,5 mm, was eine gewisse Wasseraufnahme aufweist.
Materialien, Instrumente und Reagenzien für die CAM-Elektrophorese
Proben:gesundes menschliches Blutserum
Instrument:Netzteil DYY-6C, Elektrophoresetank DYCP-38C, überlegene Probenladung WD-9404
Die Reagenzien
1) Zelluloseacetatmembran 7X9cm
2) Barbitol-Pufferlösung mit einem pH-Wert von 8,6 (Ionenstärke 0,05–0,09, das entspricht 0,06 tid-Zeiten): Nehmen Sie 1,84 g Diethylbarbitursäure und dann 1,03 g Diethylnatriumpentobarbital, fügen Sie etwas destilliertes Wasser hinzu, um es zu erhitzen, damit es sich auflöst, und machen Sie es bis zu 1000 ml;
3) Fleck: Ponceau S 0,2 g, Trichloressigsäure 3 g, 100 ml destilliertes Wasser hinzufügen;
4) TBS/T oder PBS/T: 45 ml 95 %iges Ethanol, 5 ml Eisessig, 50 ml destilliertes Wasser hinzufügen;
5) Reinigungslösung: 70 ml wasserfreies Ethanol, 30 ml Eisessig.
Experimentiermethoded
1) Bereiten Sie die Membran vor: Tauchen Sie die Membran 30 Minuten bis 8 Stunden lang in die Barbitol-Pufferlösung, nehmen Sie sie heraus und entfernen Sie die überschüssige Lösung mit saugfähigem Papier.
2) Laden von Proben: Unterscheiden Sie die raue und die glatte Seite der Membran und markieren Sie auf der rauen Seite eine Linie im Abstand von 1,5 cm zum oberen Ende.Laden Sie Proben mit dem überlegenen Probenladewerkzeug auf der rauen Seite.Hinweis: Die Proben sollten auf der rauen Seite der Membran geladen werden.Nachdem die Serumproben vollständig in die Membran eingedrungen sind, drehen Sie die Membran um, legen Sie die raue Seite (mit den Proben) nach unten in den Tank und legen Sie das Ende mit den Proben in die negative Elektrode.
3) Elektrophorese: Schalten Sie die Stromversorgung ein, 0,4～0,6m A/cm Membran, die Laufzeit beträgt 30-45 min.Schalten Sie nach der Elektrophorese den Strom aus.
4) Beizen und reinigen: Nehmen Sie die Membran aus dem Tank und tauchen Sie sie einit 5 Minuten lang in die Farbstofflösung eintauchen und dann 3-4 Mal in der Reinigungslösung reinigen, bis die Hintergrundfarbe klar ist.Die Serumproteine sollten auf den Bändern angezeigt werden, und normalerweise gibt es fünf Zonen vom oberen Ende bis zur markierten Linie: Albumin, α1-Globulin, α2-Globulin, β-Globulin, γ-Globulin.
5) Konservierung: Trockenelektrophorese durchführenBandLassen Sie es 10-15 Minuten lang in der Reinigungslösung einweichen, nehmen Sie es dann heraus und kleben Sie es auf ein sauberes Glas. Nach dem Trocknen bildet sich ein transparenter FilmBand.
ExperimentErgebnis
Der Trenneffekt von Serumproben ist gut und es gibt kein Band-Tailing-Phänomen.Die Wiederholbarkeit der Ergebnisse variiert aufgrund der Testverfahren und der Methoden des Experimentators und ist hoch.
Abschluss
Das schnelle klinische Elektrophorese-Detektionssystem (ElektrophoresetankDYCP-38C,StromversorgungDYY-6C und überlegene Probenladung WD-9404), hergestellt von unsUnternehmen Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdden experimentellen Anforderungen genügt,UndDie Ergebnisse sind reproduzierbar, einfach und schnell, geeignet fürLehrenForschung.
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Zeitpunkt der Veröffentlichung: 14. November 2022